ژل رویال از غدد آرواره ای و حنجره تحتانی زنبورعسل های کارگر ترشح شده، و رژیم غذایی منحصر به فردی برای متمایز کردن زنبورعسل ملکه و حفظ زندگی است. درمقایسه با زنبورعسل های کارگر دیگر، یک زنبورعسل ملکه ای که درسرتاسر زندگی اش منحصراً با ژل رویال تغذیه می شود دارای بدنی بزرگ تر، طول عمر 20 برابر، و غدد بخوبی رشد کرده می باشد. ژل رویال یک ماده کرم رنگ سفید – زرد، اسیدی، قابض ( مانع ترشح ) متشکل از آب (62 – 5/68 درصد)، پروتئین ها (11 –18درصد)، قندها (7 –18درصد)، لیپیدها (2 – 8 درصد)، اسیدهای امینه، ویتامین ها، و کانی ها است. اثرهای دارویی و سلامتی ژل رویال از قبیل بهبود مسائل وابسته به سیستم تولید مثل، مانع پوستی، و سلامت ذهنی گزارش شده اند؛ بنابراین ژل رویال در مکمل های غذایی، داروها، و مواد آرایشی سراسر جهان مورد استفاده قرار گرفته است.
از طرف دیگر، رخدادهای ناسازگار بوجود آمده توسط ژل رویال در دهه های اخیرگزارش شده اند، که بیشترشان نشانه های وابسته به آلرژی هستند. این نشانه ها در محدوده ی متوسط تا شدید بوده و شامل رینیتیس، اگزما، درماتیت تماسی، اورتیکاریا، ورم ملتحمه چشم، التهاب قولون با خون ریزی، آسم حاد، اسپاسم برونش، و آنافیلاکسی ( حساسیت زیاد ) کشنده است. کسانی که مبتلا به آلرژی هستند مثل بیماران آسمی و درماتیت مرتبط با آلرژی احتمالاً دارای ریسک واکنش آلرژیک نسبت به ژل رویال می باشند. گزارش شدکه 52 % از بیماران آلرژیک در استرالیا یک پاسخ ایمونوگلو بولین مثبت E (IgE) نسبت به ژل رویال داشتند. لیونگ و دیگران همچنین نشان دادند که در هنگ کنگ، 16.8 درصد از تعداد 666 نمونه های سرم بیمار آسمی بالغ حاوی واکنش به ژل رویال IgEبود. این بیماران ممکن است بوسیله محصولات ژل رویال حساس شده باشند ؛ بهرحال، همچنین پیشنهاد می شود که مواد آلرژی زای ناشناخته دارای واکنش متقابل با ژل رویال وجود دارند.
وجود مواد آلرژی زای واکنش دهنده متقابل با ژل رویال برای مدت هاست که پیشنهاد شده است زیرا در چند مورد نشانه های آلرژیک پس از اولین بار خوردن ژل رویال مشاهده شده اند. تعداد انگشت شماری از گزارش ها درباره واکنش متقابل با ژل رویال موجود است. ویلا و دیگران یک مورد از آنافیلاکسی ( حساسیت زیاد ) پس از اولین بار خوردن ژل رویال گزارش داده و واکنش متقابل بین ژل رویال و(HDM) Dermatophagoides pteronyssinus بوسیله آنالیزآزمایش بازدارندگی انتقال پروتئین ها از سرم بیمار نشان دادند. لی و دیگران واکنش متقابل بین ژل رویال و زهر زنبور عسل در بیماری با آلرژی حرفه ای نشان دادند که بوسیله ژل رویال و زهر زنبور هر دو حساسیت پیدا کرده بود.
بهرحال، سبب شناختی زیربنایی واکنش آلرژیک ژل رویال پس از اولین وهله خوراکی بخوبی ادراک نمی شود، اگرچه واکنش های آلرژیک جدی در بسیاری موارد اتفاق افتاده اند. بنابراین، کشف اطلاعات از دست رفته درباره مواد آلرژی زای واکنش دهنده متقابل با ژل رویال برای اجتناب از سوانح غیرضروری آینده حیاتی است. دراین مطالعه، هدف مان ارزیابی این نکته است که آیا مواد آلرژی زای واکنش دهنده متقابل با ژل رویال در بیماران درماتیت مرتبط با آلرژی وجود دارد.
مواد و روش های اجرای آزمایش
در اینجا به صورت خلاصه مواد مورد استفاده و روش های مورد استفاده رد اجرای آزمایش بیان شده اند.
موضوع ها ( سوژه ها )
این مطالعه توسط کمیته اخلاقیات مستقل از بیمارستان دانشگاه گیفو تایید شد و رضایت آگاهانه و مکتوب بیمار بدست آمد. نمونه های سرم از 30 بیمار بستری با درماتیت مرتبط با آلرژی بدست آمد که به بخش درماتولوژی، بیمارستان دانشگاه گیفو رفته بودند. معیارهای واجدیت شرایط سن 20 سال یا بیشتر و تشخیص بیماری درماتیت مرتبط با آلرژی بود. تایید کردیم که همه بیماران هیچ تماس قبلی با ژل رویال در مصاحبه های شان نداشتند. هر 30 بیمار معیارهای شمول را برآورده کرده و برای این مطالعه برگزیده شدند. موارد زیر اندازه گیری شدند : Thermo ScientificTM ViewAllergyTM39 ( تست های همزمان چند مواد آلرژی زا با استفاده از نیم کیفیت ImmunoCAPTM, Thermo Fisher Diagnostics K.K., Tokyo, Japan ) ، تیترهای IgE غیر ویژه ، نمره های قسمت اگزما و شاخص شدت ، مقادیر تیموس و شموکین تنظیم شده با فعال سازی ، شماره های ائوزینوفیل ، مقادیرلاکتات دئیدروژناز ، مقادیر ImmunoCAPR Specific IgEدر مقابل HDM (Dermatophagoides farinae) و زهرزنبور عسل (Apis mellifera)، و مقادیر آنتی بادی های IgE ویژه اجزای آلرژن HDM. اطلاعات بالینی و داده های آزمایشی از بیماران درماتیت مرتبط با آلرژی درجدول 1 نشان داده شده اند. نمونه های سرم از کارکنان کارخانه قرارگرفته در معرض ژل رویال که نسبت به ژل رویال و نه مواد آلرژی زای دیگری آلرژی داشتند، هم برای آنالیز blotting Western مورد استفاده قرار گرفتند، و اطلاعات بالینی شان در اطلاعات پشتیبان توصیف می شود.
آماده سازی نمونه ماده آلرژی زا
عصاره های اجسام خام European HDM (Dermatophagoides pteronyssinus) و American HDM (Dermatophagoides farinae) از شرکت Biostir Inc. (Osaka, Japan) خریداری شدند. عصاره های ماده آلرژی زای ساخته شده متعارف از فلس گربه (Felis domesticus)، گرده علف تیموتی (Phleum
pretense) ، گرده سرو ژاپنی (Cryptomeria japonica)، و گرده mugwort ژاپنی indica) (Artemisia از شرکت انستیتوی آلرژی محیطی توکیو خریداری شدند. آنها با یک غلظت پروتئین 3 میلی گرم / میلی لیتر با یک آب نمک فسفات بافر شده 0.01M با روش لوری تهیه شدند. ما غلظت پروتئین را تا 160 میکرو گرم / میلی لیتر با 0.01M آب نمک فسفات بافر شده قبل مصرف تنظیم کردیم. مواد خام با انجماد خشکانده شده از گندم سیاه (Fagopyrum esculentum) و بادام زمینی (Arachis hypogaea) از Stallergenes Greer plc (London) خریداری شدند. میگوی صورتی آلاسکا (Pandalus borealis)، سوسک آلمانی germanica) (Blatella ، بید ابریشم (Bombyx mori)، و خرچنگ خوراکی (Cancer pagurus) از شرکت بیوستار خریداری شدند، و زهر زنبورعسل از LATOXAN فرانسه بدست آوردیم. خرچنگ برقی به تازگی منجمد شده (Chionocetes spp.) از کاماشوی ژاپن خریداری شد، و صدف های بیرونی و عضله های ساق پا هر دو با انجماد خشکانده شده و به صورت پودری درآمدند. پودرهای خشکانده شده با انجماد در 0.01MPBS ( پ هاش 7.4 ) با یک نسبت وزن به حجم 1:30 حل شده و شبانه روزی در 4 درجه سانتی گراد هم زده شدند. پس ازعصاره گیری و سانتریفوژ 15,000 ×g) به مدت 30 دقیقه )، مواد شناور با 0.45-μm غشای DISMIC1 -13HP فیلتر شده، و غلظت های پروتئین شان با استفاده از جعبه آزمایش پروتئین BCA Pierce™ اندازه گیری شده و با 160 میکرو گرم / میلی لیتر با 0.01M آب نمک فسفات بافر شده تنظیم شدند. ژل رویال خشکانده شده با انجماد از شرکت API ژاپن خریداری شد.
ELISA
شناخت ایمونوگلوبین ای (IgE ) پروتئین های ژل رویال توسط نمونه های سرم بیمار دارای درماتیت مرتبط با آلرژی و تیترهای آنتی بادی شان بوسیله ELISA ارزیابی شدند. صفحه های ELISA با 7.5 میکرو گرم / میلی لیتر با ژل رویال خشکانده شده با انجماد در بافر 0.05M کربنات / بی کربنات ( پ هاش 9.6 ) پوشانده شده و به مدت 1 ساعت در 37 درجه سانتی گراد انکوبه شدند. بلوک شدگی با EzBlockChemi به مدت 1 ساعت در 37 درجه سانتی گراد انجام شد. نمونه های سرم رقیق شده سریالی به صفحه های ELISA افزوده شده و و شبانه روزی در4 درجه سانتی گراد انکوبه شدند. آنتی بادی های ایمونوگلوبین ای پیوندی با ژل رویال توسط انکوباسیون با یک آنتی بادی Fc ایمونوگلوبین ای ضد انسانی موش توام شده با پراکسیداز horse radish (HRP) رقیق شده به میزان 16 هزار برابر در آب نمک بافر شده تریس با Tween R 20 به مدت 1 ساعت در 37 درجه سانتی گراد ردیابی شده و پس از آن انکوباسیون با یک سوبسترای TMB به مدت 1 ساعت در 37 درجه سانتی گراد انجام شد. واکنش با افزودن 1 مولکول فسفات متوقف شد، و جذب سطحی در 450 نانومتر اندازه گیری شد. صفحه ها بعد از هر مرحله انکو باسیون با TBS-T آبکشی شدند. همه نمونه ها در یک نسخه 3 گانه آزمایش شدند. سرم انسانی حوضچه تجاری به عنوان یک کنترل منفی مورد استفاده قرارگرفت، و محلول TBS-T به عنوان جای خالی مصرف شد. تیترهای آنتی بادی های ویژه ژل رویال به صورت بالاترین نسبت رقیق شدگی بیان می شوند که درآن یک واکنش مثبت مشاهده شد. یک واکنش مثبت، یعنی یک میزان مثبت ایمو نوگلوبین ای به عنوان یک جاذب بزرگ تر از مقدار میانگین برای جاهای خالی به علاوه 0.01 تعریف شد.
آزمایش بازدارندگی ELISA
برای مطالعه واکنش دهی متقابل بین ژل رویال و مواد آلرژی زای معمول دیگر، یک آزمایش بازدارندگی ELISA اجرا شد. رویه تجربی مثل همان روش آزمایش تجربی توضیحی در بالا بود، بجز در مورد پیش انکوباسیون با مواد آلرژی زا. نمونه های سرم رقیق شده در طول شبانه روز در 4 درجه سانتی گراد با حجمی برابر از یک محلول عصاره آلرژی زا یا یک محلول TBS-T از پیش انکوباسیون شدند، که به عنوان یک ماده کنترل مورد استفاده قرار گرفت. غلظت نهایی پروتئین عصاره های آلرژی زا 80 میکروگرم / میلی لیتر بود، و نسبت های رقیق شدگی نمونه های سرم تعریف شدند به طرزی که جاذب کنترل تقریباً 10/0 شد ؛ بنابراین، نسبت رقیق شدگی ماده شماره 39، به میزان 256 برابر، نسبت رقیق شدگی ماده شماره 44 مقدار 64 برابر بود، و رقیق شدگی ماده شماره 36 و رقیق شدگی ماده شماره 37 به میزان 32 برابر و ، نسبت رقیق شدگی ماده شماره 48 مقدار 4 برابر بود.
ادامه این مقاله را در قسمت بعدی آن مطالعه کنید
